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儿童维生素A缺乏 调查方案
 
一、 背景

儿童维生素A 缺乏患病率是反映儿童营养状况的重要指标。儿童维生素A 缺乏可导致儿童呼吸道感染和腹泻发病率、死亡率的增加,此外也是导致儿童失明的重要原因,但以上患病情况国内均只有局部地区的资料,也需要进行全国性专门调查。

二、 目的

获得具有全国代表性的0-5岁儿童血清维生素A含量分布情况及儿童血清维生素A缺乏患病率。

三、 内容和方法

根据“世界儿童首脑会议”2000年目标要求,评价维生素A缺乏有三项检测指标:(1)儿童夜盲症患病率;(2)6月至6岁儿童血清维生素A低下百分率;(3)母乳维生素A缺乏率。儿童夜盲症及其它临床维生素A 缺乏的病例近十年来在我国已很少见。但维生素A亚临床缺乏并不少见,据近年来国内北京、天津、湖北、四川、江西、河北等地局部地区学龄前儿童维生素A水平检测结果表明,儿童血清维生素A 低于20ug/dl,城市为0-16.7%,农村为10-55.9%,尤其多数农村县儿童维生素A 低于20ug/dl在20%以上。但以上儿童血清维生素A检测均为局部地区资料,标本量小,不能反映全国不同地区儿童血清维生素A的水平和缺乏情况。

儿童夜盲症及其他临床维生素A 缺乏的病例在我国虽很少见,国际以此作为临床维生素A缺乏的基本指标,本次按国际调查要求,进行此项调查。儿童血清维生素A 含量调查是本次调查的重点。儿童维生素A缺乏标准为血清维生素A 含量≤20μg/dl(0.70μmol/l)。

1、抽样方法基本同于出生体重调查

边远地区是我国儿童营养的重点地区,为更多地了解边远地区儿童维生素A 及贫血情况,边远地区多抽一些省,以便为边远地区儿童维生素A 干预提供依据。故沿海抽取4个省为北京、山东、浙江、广东;内地5个省为吉林、山西、湖北、四川、广西;边远5个省为青海、云南、贵州、新疆、内蒙。

考虑到维生素A样本全部集中到首都儿科研究所检测,维生素A 样本要冷冻运送,时间过长会影响维生素A检测结果,因此,抽样县距省会运送时间以不超过6小时为宜。其抽样市县及编号如表五。

2、样本量的确定和分配

每市县0-5岁儿童共分<2岁、2-3岁、4-5岁3个年龄组,每个年龄组66例,每市县约200例,全国共计8400例。

3、 测查对象

为了使测查结果对本市县有一定代表性,能反应该市县儿童维生素A缺乏情况,城市测查儿童分布在抽样市的2或3个城区内,每个城区随机抽取3或2个地段,共计6个地段,每个地段每个年龄组儿童各11例。农村县将全县各乡(镇)以1998年年人均收入由高至低排序,等距随机抽3个乡,每个乡随机抽2个村。每个村每个年龄组各11例。乡要求除外县城的城关乡、村除外乡所在地的村,为了保证村内抽查儿童的随机性,将全村按顺序编号,若全村有M户,在1-M户间任选一个随机数为第一户,以第一调查户出大门右拐,距离该户最近的为第二调查户,依此类推,直到所取血清样本完成。

为了控制路途过长对维生素A样本的影响,抽取3个乡及乡距村的距离以不超过4小时为宜,所在乡卫生院要有冰箱及离心机,以便及时处理样本。抽中3个乡的年人均收入和出生率的平均值要与全县年人均收入相近,使抽取的乡对全县有较好的代表性。为了保证抽中乡抽查儿童数符合样品要求,抽样乡总人口数宜超过6000人。

表五、 15省、自治区抽样市县名称及编码
地区 大城市 中小城市 一类县 二类县 三类县 四类县 合计
沿 海 A北京 1北京   2大兴 3延庆     3
B山东   1潍坊   2费县 3巨野   3
C浙江   1湖洲 2浦江 3临海     3
D广东 1广州   2高要   3海丰   3
内 地 E吉林 1长春   2盘石 3榆树     3
F山西   1阳泉 2清徐   3代县   3
G湖北 1武汉     2枣阳 3长阳   3
H四川   1绵阳   2双流   3什邡 3
I广西   1贵港     2大新 3来宾 3
边 远 J甘肃   1白银市 2永登   3陇西   3
K青海 1西宁     2民和 3同仁   3
L内蒙   1包头     2 商都 3伊金霍格旗 3
M新疆   1石河子   2托克逊 3鄯善   3
N云南 1昆明   2 玉溪     3双柏 3
O贵州   1遵义     2普定 3麻江 3
合计   6 9 7 8 10 5 45

4、标本采集、贮存、运输

(1) 儿童采血在无强光照射的室内进行,以集中在一个地点(学校、卫生室)采样为主。
(2) 采样和贮存:0-5岁抽查儿童用温水袋对儿童左手无名指温至红润后,以统一采血针刺指尖,用子弹头小塑料管从手指取血200微升。采样后以胶布封好,贴好编号,存放在避光的冰包内。标本编号一定要与儿童营养情况调查表的编号一致。为减少采集标本在室温下存放时间过长而影响维生素A 的检测,要求采样时间不超过4小时后返回乡卫生院或县。儿童血在避光条件下分离血清,放在血清管内,-20℃冰柜(或双门冰箱冷冻室)冷冻避光贮存。但切勿将未离心的全血标本放在冰柜内,以免溶血造成标本作废。
(3) 运送:各市县采集血清,放冷冻冰包内由专人送到省妇幼保健机构,在-20℃以下冰柜中保存。待省内所有市县血清标本收齐,由首都儿科研究所人员乘飞机用冰包将标本运回。为了避免运送时间过长对维生素A检测造成的影响,要求用干冰或冰包由市县运送到省或省运送到首都儿科研究所均不超过6小时,首都儿科研究所将所有标本存在-70℃以下冰柜中待检。

5、问卷调查

根据WHO资料,判断某地区是否存在维生素A 缺乏的公共卫生问题及维生素A缺乏的严重程度有如下指标

指标 轻度 中度 重度
功能性:夜盲症(24-71月儿童)
生化:血清视黄酮(≤0.70umol/l)
母乳视黄酮(≤1.05umol/l)
>0-<1% ≥1%-<5% ≥5%
≥2%-<10% ≥10%-<20% ≥20%
<10% ≥10%-<25% ≥25%
5岁以下儿童死亡率
2周内发病
腹泻
发热,ARI
≥50‰

>20%
>20%

 

 

 

 

为了解儿童血清维生素A含量与以上指标之间的相互关系及与喂养、经济、父母文化程度的关系,本次还要进行问卷调查。
(1)调查问卷

抽样村中采集维生素A血清的200名0-5岁儿童,全部要求向儿童的母亲询问家庭情况,儿童喂养情况及疾病情况,母亲喂养知识等内容。问卷为统一设计的“家庭及儿童营养情况调查表”。

(2)抽样市县一般情况调查

为了更好的分析与儿童营养评价相关的资料,向市县统计局摘录1998年本县的经济及人口,儿童死亡率资料。城市资料不包括近郊县及远郊县资料,仅为城区资料。调查内容见“市(县)基本情况调查表”。


6、检测方法:微量荧光法

本次检测拟采用荧光法,作为群体样品检测。其检测程序:血清20ul,以氢氧化钾液溶化,60℃水浴保温,环己烷提取后,以岛津RF-54荧光分光光度计检测。


7、结果分析

(1) 比较城乡及不同地区儿童血清维生素A的水平;

(2) 比较城乡地区及不同儿童血清维生素A 低下的比例;

四、 资料上报、分析计算

城市有关资料由医院或地段收集、检查后上报市妇幼保健机构,农村有关资料由乡卫生院收集检查后上报县妇幼保健机构,市县妇幼保健机构对有关资料审核后报省妇幼保健机构,经省卫生厅妇幼审查后,送首都儿科研究所,由首都儿科研究所负责资料分析计算。

由于本次抽样为不等比例抽样,不能直接计算算术平均值,而必须计算三大层、城乡及全国的加权平均值。各市县儿童血红蛋白和问卷调查等资料由首都儿科研究所参加各省调查的有关人员带回。维生素A 检测全部由首都儿科研究所完成,统一进行资料分析。

五、 质量要求和质量控制

此次调查任务只有3个月的时间,为及时了解各调查点工作进展情况和调查质量,要求承担此次调查任务的44个市(县)妇幼保健院(所)每月填报“三项调查月报表”(表5)一式两份,并于8月、9月、10月下旬分别寄至省妇幼保健院和首都儿科研究所

1、质量要求

资料填写完整性100%,不能有漏项。

2、质量控制:

①首都儿科研究所人员亲自参加每个市县的现场调查、问卷、标本采集、分离、贮存、转运的全部过程,保证现场调查质量。现场审卡,对问卷填写的完整性、逻辑性和正确性进行检查,发现错误及时纠正。

②维生素A采样在避光的室内进行,采样后立即存放在避光的冰包内,血清分离在暗光下进行,以减少强光或温度对血清维生素A的影响。

③现场采集的维生素A标本存放在冰包内不超过4小时,市县运送到省不超过6小时。省送北京贮存不超过6小时,市、县、省血清标本存放在-20℃以下的冰箱中,首都儿科研究所存放在-70℃的低温冰箱中,确保所有血清标本,冰冻后直到检测前始终处在冰冻状态,以消除样本运送、贮存不当对血清维生素A 的影响。

④为了保证检测人员检测结果的一致性,固定4人检测,并进行预实验两个月,使4人检测一致性>95%,并且每一操作程序均以专人负责,以保证操作一致性。

⑤加样器分别固定量程加不同种试剂。所用加样器以美国CDC实验室校正加样器的程序,在实验开始和试验进行中的每一个月对其量程进行校正。

⑥实验开始前,以美国CDC实验室以高压液相法测定浓度为38.16μg/dl的100份标本训练实验技术,所测浓度达到美国专家要求的35-45μg/dl(实测范围为36.53-44.13μg/dl),重复性实验CV2.9-9.9%,5次回收实验的回收率98.2-108.8%,平均回收率102.2%。

⑦实验开始前,取10名40岁以下未服避孕药妇女的静脉血共50ml,制备混合血清。取其中1/3作高浓度质控血清,另 1/3加生理盐水稀释做低浓度质控血清,分别分装在小管中贮存于-70℃冰柜。在20天中,每日测定两份高浓度及两份低浓度质控血清的维生素A 含量,分别计算其维生素A均值和范围。将20天所有质控血清的维生素A测定值,计算高、低浓度质控血清的总均值、标准差,95%、99%可信区间,绘制高、低浓度质控血清均值及范围图。

质控要求:

⑴当某日高、低浓度质控血清维生素A浓度有一个均值或范围超出99%可信区间,该天实验重做。

⑵当某日高、低浓度质控血清维生素A浓度均值或范围都超出95%可信区间,该天实验重做。

⑧每天测定儿童血清维生素A浓度时,除在实验首尾测定两个高、低浓度质控血清,和一组标准曲线。在检测全部儿童血清维生素A标本的43天中,标准曲线的相关系数平方为0.99-0.9999。43组曲线的前后差异≤10%。实验检测数据录入后核对无误。

六、 组织领导和各级职责

1. 卫生部妇幼司负责组织领导和实施本次全国调查,有关省、自治区卫生厅妇幼处负责组织领导和实施本省调查。有关市县卫生局,负责组织领导和实施本次调查。

2. 首都儿科研究所负责本次调查方案表格设计、人员培训、质量检查、资料处理分析及技术咨询。省妇幼保健机构负责本省的人员培训、质量控制、资料收集整理上报及技术指导。市县妇幼保健机构负责本市县调查人员的培训、质量控制、资料收集整理上报及技术指导。

3. 为了保证本次调查的质量,儿童血清维生素A测定,省级要有1-2人,市县要有专门检验负责。做到任务、人员、工作质量的三落实。

七、 时间安排

维生素A 现场调查于1999年12月~2000年3月进行